LOT2050 - Microbiologia Experimental (2021)

LABORATÓRIO VIRTUAL DE COLORAÇÃO DE GRAM

https://learn.chm.msu.edu/vibl/vibl/GramStain/gram_stain_HTML5Canvas.html

Objetivo: A coloração de Gram é a coloração mais frequentemente usada no laboratório de microbiologia clínica e geralmente é a primeira etapa na identificação de bactérias. Além da reação de Gram, a morfologia e a configuração da bactéria podem ser observadas, ou seja, cocos em cadeias Gram-positivos ou bastonetes Gram-negativos.

Método: Uma suspensão de bactérias é colocada em uma lâmina de vidro limpa, seca e fixada com calor. A lâmina é então tingida com cristal violeta , tratada com iodo para complexar o cristal violeta na parede celular gram-positiva, descolorada com álcool e, em seguida, corada com safranina (lavagem com H₂O entre cada etapa). A lâmina é então visualizada sob o microscópio usando a objetiva de 100x (ampliação de 1000x).

Passos:

1.     Fixe a lâmina com calor: clique no bico de Bunsen, passe a lâmina suavemente duas ou três vezes (1-2 segundos) através da chama. Não superaqueça - isso causará distorção das células;

2.     Inundar a lâmina com cristal violeta por 1 minuto;

3.     Enxágue com H₂O;

4.     Inundar a lâmina com iodo por 1 minuto;

5.     Enxágue com H₂O;

6.     Descolorir com álcool por 5-10 segundos;

7.     Enxágue com H₂O;

8.     Inundar a lâmina com safranina por 1 minuto;

9.     Enxaguar com H₂O;

10.  Visualize a lâmina no microscópio.