Protocolo da aula prática
A Cinética Enzimática estuda os mecanismos de reações químicas catalisadas por enzimas. Nesta prática, a enzima escolhida para este estudo é a invertase de levedura que catalisa a hidrólise da sacarose para produzir glicose e frutose:
A determinação da velocidade da reação (ou da
atividade enzimática) pode ser feita através da dosagem dos açúcares redutores formados, produtos (frutose e glicose). Para isso, vamos primeiro, construir uma curva padrão. Conhecendo-se
por colorimetria a quantidade (mmols)
de açúcares redutores formada, por um cálculo estequiométrico simples, pode-se
determinar a quantidade correspondente (mmols)
de sacarose hidrolisada. Nestas experiências as velocidades da reação serão
expressas em mmols de sacarose hidrolisada por minuto. A atividade enzimática é medida em unidade (U), sendo que 1 U é a quantidade de enzima necessária
para a formação de 1 mmol de produto por minuto.
Assim, podemos estudar as influências das concentrações de enzima e substrato nas velocidades de uma reação enzimática, examinar as curvas obtidas experimentalmente, calcular os parâmetros cinéticos e discutir seus valores e importância.