Exercícios Aula 6 - Cromatografia de Troca Iônica
Para realizar essa atividade, acesse o link http://www.agbooth.com/pp_web/
Escolha "complex mixture" e faça a atividade abaixo com as proteínas 3 e 37.
Para cada proteína, otimize uma precipitação com sulfato de amônio seguida de uma cromatografia de troca iônica. Para mudar as condições, use os botões "abandon this step and continue" para repetir o último passo ou "abandon scheme and start again" para começar do começo.
a) Faça print das telas ao longo do processo, tanto das tentativas de otimização quanto do resultado final e cole no powerpoint ou word, adicionando pequenas frases como "reduzi pH para aumentar interação com coluna", "aumentei sal para mudar padrão de eluição" para explicar cada alteração que fizer.
b) Ao final do arquivo, detalhe como foram feitos os cálculos de enriquecimento e recuperação que o software apresenta. Considere que todas as frações têm 1ml de volume e que cada passo é calculado em relação ao lisado original.
c) Calcule a recuperação e o enriquecimento do passo de cromatografia de troca iônica em relação ao material coletado da precipitação com sulfato de amônio (o software não apresenta esse resultado).
d) Discuta qual seria uma faixa plausível de pI para essa proteína.
O arquivo final com todas as informações e respostas para as duas proteínas deve ser enviado pela ferramenta abaixo.
Dica: para identificar as frações da cromatografia que contêm a enzima de interesse, use a opção "assay enzyme activity". Para coletar as frações do seu interesse, use a opção "pool fractions"